傳統(tǒng)上,孵化器一直是大多數(shù)生物和生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室的支柱,以生長或維持生物文化,繁殖菌落或繁殖/生長昆蟲。zui基本的孵化器使研究人員能夠重新創(chuàng)建嚴(yán)格的溫度條件,以zui佳地生長,發(fā)育和/或維持細(xì)小細(xì)胞。溫度均勻性也很關(guān)鍵,因?yàn)樯瞽h(huán)境的波動(dòng)可能是致命的。
隨著生物技術(shù)和生物制藥*域的擴(kuò)大,對高精度培養(yǎng)箱的需求也在增加。另外,關(guān)于良好實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)規(guī)范(GLP和GMP)的法規(guī)要求已經(jīng)完善和強(qiáng)化。除其他外,這導(dǎo)致了用于細(xì)胞培養(yǎng)控制和監(jiān)測的復(fù)雜性的增加。附加的儀器功能意味著額外的成本,使許多實(shí)驗(yàn)室管理人員想知道,對于應(yīng)用而言,是否確實(shí)需要所有的花哨功能。
實(shí)際上,實(shí)驗(yàn)室預(yù)算的縮減使許多實(shí)驗(yàn)室尋求負(fù)擔(dān)得起的選擇,而這些選擇不會(huì)損害其實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對于帶有二氧化碳傳感器和控制器的培養(yǎng)箱,樣品類型將確定是否必要,因?yàn)槟承┘?xì)胞類型依賴于理想的培養(yǎng)。這里有幾點(diǎn)要考慮:
我需要控制CO 2嗎?
孵化器通常控制用戶指定的內(nèi)部溫度和濕度條件。另一個(gè)共同特征是能夠?qū)⒍趸迹–O 2)控制在5%左右。這很重要,原因有兩個(gè):5%的CO 2緊密模擬細(xì)胞在人體系統(tǒng)中會(huì)經(jīng)歷的生理?xiàng)l件,并起著至關(guān)重要的pH緩沖劑的作用。實(shí)際上,培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的pH值非常重要,以至于大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基都含有指示劑,因此操作員可以從視覺上識(shí)別出危險(xiǎn)的pH值變化。培養(yǎng)中的動(dòng)物細(xì)胞已從其較大的生物“宿主”(即器官)中移出,但研究人員希望獲得與活生物體zui相關(guān)的結(jié)果。
因此,控制盡可能多的參數(shù)以模仿這些條件至關(guān)重要。一些與細(xì)菌(例如大腸桿菌)或單細(xì)胞真核細(xì)胞(例如 啤酒酵母)一起工作的生物實(shí)驗(yàn)室不需要二氧化碳控制即可實(shí)現(xiàn)zui佳培養(yǎng)。因此,這些實(shí)驗(yàn)室通常會(huì)選擇僅控制溫度和濕度的更經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)箱。但是,如果您的實(shí)驗(yàn)室正在培養(yǎng)動(dòng)物的細(xì)胞或組織,那么“我是否需要控制CO 2?” 這個(gè)問題的答案肯定是“是的”。
控制CO 2級別:導(dǎo)熱率還是紅外?
CO 2孵化器通常可以指定二氧化碳水平的設(shè)定點(diǎn)(通常為5%)。該培養(yǎng)箱包含一個(gè)CO 2傳感器和一個(gè)控制模塊,當(dāng)液位下降時(shí),該模塊會(huì)提示CO 2的流動(dòng)。打開培養(yǎng)箱門時(shí),由于濃度與外部環(huán)境的差異,CO 2迅速從培養(yǎng)箱中噴出。傳感器檢測到該下降,繼電器發(fā)送信號以提高二氧化碳水平。有兩種常見形式的檢測器可用于監(jiān)測培養(yǎng)箱中的二氧化碳水平:導(dǎo)熱率和紅外線。
導(dǎo)熱率傳感器可測量溫度電阻的變化。在培養(yǎng)箱中,一個(gè)傳感器暴露于培養(yǎng)箱(環(huán)境)中,而另一個(gè)則被隔離(對照)。由于二氧化碳的減少也會(huì)導(dǎo)致溫度降低,因此兩個(gè)傳感器之間的電阻會(huì)發(fā)生變化。這將觸發(fā)從CO 2儲(chǔ)罐進(jìn)行“吹掃” ,一直持續(xù)到腔室達(dá)到預(yù)編程的設(shè)定點(diǎn)為止。不幸的是,培養(yǎng)箱的溫度設(shè)置和濕度水平也會(huì)影響熱導(dǎo)率傳感器,因此存在一定程度的誤差。經(jīng)常打開培養(yǎng)箱門時(shí)尤其如此。打開門,不僅CO 2丟失,但相對濕度下降。因此,熱導(dǎo)率監(jiān)測培養(yǎng)箱更適合長期保存細(xì)胞培養(yǎng)物。
紅外線(波長比可見光長的不可見能量)是更準(zhǔn)確(但也更昂貴)的CO 2液位監(jiān)測系統(tǒng)。一個(gè)光學(xué)傳感器,測量紅外光譜中的光吸收,尋找培養(yǎng)箱中的二氧化碳含量;吸收程度與CO 2量成正比。吸收不受溫度或濕度的影響,因此它是比熱導(dǎo)傳感器更可靠的CO 2濃度指示器。大多數(shù)儀器都有一個(gè)獨(dú)立的傳感模塊,該模塊會(huì)按設(shè)置的時(shí)間間隔自動(dòng)校準(zhǔn)。盡管存在成本較高的缺點(diǎn),但是當(dāng)需要頻繁訪問培養(yǎng)箱中的內(nèi)容物時(shí),紅外傳感單元是理想的解決方案。