避免污染

哺乳動物細胞在富含營養(yǎng)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其溫度有利于幾乎任何所需或不需要的微生物的生長。盡管許多研究人員在其培養(yǎng)基中使用抗生素和抗真菌劑作為預防污染的方法，但這并不能解決持續(xù)的方法學錯誤，并且常常隱瞞存在問題的事實。如果可能的話，避免使用這些藥劑，并努力改進您的無菌技術并開發(fā)一個系統(tǒng)，以保持您的培養(yǎng)箱清潔。

培養(yǎng)箱污染的主要來源是微生物通過檢修門進入。這可能是顯而易見的，但保持頭腦**重要將有助于您養(yǎng)成在防止完全污染方面有很長一段路的習慣。將東西放入培養(yǎng)箱時，務必戴上手套，盡量縮短內(nèi)玻璃門打開的時間。偶爾用70％乙醇擦拭門把手。每周更換一次，將水保持在濕度盤中。定期用肥皂和水擦洗鍋，然后用乙醇擦拭; 或者，對鍋進行高壓滅菌。如果培養(yǎng)基溢出培養(yǎng)箱，請取下擱板并徹底清潔。

這些清潔儀式的頻率取決于培養(yǎng)箱獲得的流量。大型實驗室中的培養(yǎng)箱可能需要更頻繁的清潔。如果你從一個干凈的培養(yǎng)箱開始，并注意進出的東西，它應該保持清潔數(shù)周或數(shù)月。

多個內(nèi)門在門開啟后增加溫度和CO2恢復時間。

確保二氧化碳水平應該是它應有的水平

大多數(shù)哺乳動物細胞培養(yǎng)基使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)。CO2是該緩沖系統(tǒng)的重要組成部分，必須保持在5％才能使培養(yǎng)基保持在生理pH值。雖然基本上所有現(xiàn)代培養(yǎng)箱都配備了CO2傳感器來維持所需的CO2水平，但隨著時間的推移，校準可能會偏離設定點，需要通過操作員直接確定CO2水平進行偏移重新校準（即，您）。

測量培養(yǎng)箱中二氧化碳水平的**簡單，**準確的方法是使用氣體分析儀，如Fyrite®設備。這些可以從許多科學供應商處購買，并且可以用于測量CO2或O2水平的模型。氣體分析儀的操作基于在待測氣體的化學吸收之后的流體的體積膨脹。使用室內(nèi)空氣（0.04％CO2）將設備“歸零”，并通過培養(yǎng)箱門或側面的端口對培養(yǎng)箱中的空氣進行取樣。

較舊的模型培養(yǎng)箱可能需要更頻繁的重新校準。**好的新型號每個月都會對CO2傳感器進行自動重新歸零。雖然這些型號很少需要手動重新校準，但用戶仍應根據(jù)其標準操作程序（SOP）的規(guī)定，使用Fyrite裝置檢查腔室CO2水平。

保持37°C的溫度

鑒于我們的身體努力保持37°C的核心溫度，因此培養(yǎng)的哺乳動物細胞在這個溫度下**快樂也就不足為奇了。大多數(shù)二氧化碳培養(yǎng)箱都配有一個顯示內(nèi)腔溫度的顯示器，但**好定期仔細檢查，特別是如果你注意到細胞生長不理想或不典型的話。**好使用高質(zhì)量的校準溫度計來完成。打開外部和內(nèi)部培養(yǎng)箱門并將溫度計粘貼到玻璃門內(nèi)部，以便在玻璃門關閉時從外部讀取溫度。在您離開實驗室之前，請執(zhí)行此操作。第二天早上，打開培養(yǎng)箱的外門，讀取溫度計。再一次，如果讀數(shù)與37°C不同（并且溫度計準確），

培養(yǎng)箱顯示：精確的溫度和CO2控制，可實現(xiàn)高細胞產(chǎn)量和活力。

保持潮濕

培養(yǎng)箱的內(nèi)部保持在相對較高的溫度，因此培養(yǎng)基的蒸發(fā)將成為沒有高??濕度的真正問題。通過將水保持在位于培養(yǎng)箱底部的托盤中，可以在培養(yǎng)箱內(nèi)保持較高的相對濕度（90％**95％）。這樣做的缺點是充水托盤是潛在的污染源（見上文）。

采用定期的維護和清潔計劃是保持CO2培養(yǎng)箱正常運行且細胞無污染的**有效方法。